1. Государственные стандарты База ГОСТ от ФГУП "Стандартинформ" update 10.10.2019, items 44047
  2. Нормативно-техническая документация База нормативно-технических документов update 01.01.2019, items 128867
  3. Строительная документация Архив нормативных актов и документов update 2011, items 23952
Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт) ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» Российский союз промышленников и предпринимателей (РСПП) Федеральная служба по аккредитации (Росаккредитация) Межгосударственный совет по стандартизации, метрологии и сертификации (МГС) Евразийская экономическая комиссия (ЕЭК) Министерство промышленности и торговли Российской Федерации (МИНПРОМТОРГ) Евразийский экономический союз (ЕАЭС)

МУК 4.1.3489/1-17 Определение остаточных количеств фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в продуктах яичных сухих пищевых, яйцах, мясе и субпродуктах птицы методом капиллярной газожидкостной хроматографии / 4 1 3489 1 17

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств фипронила
и его метаболита фипронил-сульфона
в продуктах яичных сухих пищевых, яйцах, мясе
и субпродуктах птицы методом капиллярной
газожидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3489/1-17

Москва 2018

1. Разработаны сотрудниками ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (В.Н. Ракитский, Н.Е. Федорова, М.В. Ларькина, С.К. Рогачева, Д.Н. Соболев, В.В. Баюшева).

2. Свидетельство об аттестации МИ № РОСС RU.0001.310430/0026.09.10.17.

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 5 октября 2017 г.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

Область применения. 2

1. Погрешность измерений. 3

2. Метод измерений. 5

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы.. 6

3.1. Средства измерений. 6

3.2. Реактивы.. 6

3.3. Вспомогательные средства измерений, устройства, материалы.. 7

4. Требования безопасности. 8

5. Требования к квалификации операторов. 8

6. Условия измерений. 8

7. Подготовка к выполнению измерений. 8

7.1. Очистка органических растворителей. 9

7.2. Приготовление раствора уксусной кислоты в ацетонитриле с объемной долей 1 % (1 %-й раствор) 9

7.3. Приготовление раствора ацетона в ацетонитриле с объемной долей 30 % (30 %-й раствор) 9

7.4. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения. 9

7.5. Приготовление смеси солей для экстракции. 10

7.6. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов. 10

7.7. Подготовка колонки для очистки экстракта. 10

7.8. Проверка хроматографического поведения фипронила и фипронил-сульфона на колонке. 10

7.9. Установление градуировочных характеристик. 11

8. Отбор и хранение проб. 11

9. Выполнение определения. 11

9.1. Способ 1. 11

9.2. Способ 2. 12

9.3. Условия хроматографирования. 12

10. Обработка результатов анализа. 13

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. 14

12. Оформление результатов. 14

13. Контроль качества результатов измерений. 14

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

_____________________ А.Ю. Попова

5 октября 2017 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств фипронила и
его метаболита фипронил-сульфона в продуктах
яичных сухих пищевых, яйцах, мясе и
субпродуктах птицы методом капиллярной
газожидкостной хроматографии

Методические указания
МУК 4.1.3489/1-17

Область применения

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода газовой хроматографии с масс-селективным (МСД) и электронозахватным (ДЭЗ) детекторами для определения в продуктах яичных сухих пищевых, яйцах, мясе и субпродуктах птицы массовой концентрации фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в диапазонах 0,002 - 0,05 мг/кг (МСД) и 0,005 - 0,05 мг/кг (ДЭЗ).

Методические указания носят рекомендательный характер.

Фипронил

(±)-5-амино-1-(2,6-дихлор-α,α,α-трифтор-n-толил)-4-трифторметилсульфинил-пиразол-3-карбонитрил (ИЮПАК)

C12H4Cl2F6N4OS

Молекулярная масса: 437,2.

Фипронил представляет собой бесцветный кристаллический порошок с запахом плесени. Температура плавления: 203 °С. Давление паров: 3,7·10-4 МПа (при 25 °С). Удельная плотность: 1,71 г/см3. Коэффициент распределения в системе н-октанол/вода: KowlogP = 3,75 (при pH 7 и 20 °С). Растворимость в воде (мг/дм3, 20 °С): 3,78. Растворимость в органических растворителях (мг/дм3, 20 °С): ацетон - 545900; метанол - 137500; толуол - 3000; гексан - 28. Не устойчив к фотолизу: DT50 - 0,33 дня.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - 92 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для кроликов - 354 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - 0,36 мг/дм3 воздуха.

Основным продуктом метаболитической деградации (окисление) фипронила в воде, растениях и почве является фипронил-сульфон.

Фипронил-сульфон (МВ46136)

(±)-5-амино-1-(2,6-дихлор-α,α,α-трифтор-n-толил)-4-трифторметилсульфонил-пиразол-3-карбонитрил (ИЮПАК)

Область применения. Фипронил - инсектицид широкого спектра действия - контактный и кишечный яд. Имеет умеренные системные свойства и высокую остаточную активность при обрабатывании листьев, может применяться для обработки и протравливания семян. Блокирует рецепторы насекомых и членистоногих, нарушает передачу нервных импульсов, что приводит к параличу и гибели паразитов.

C12H4Cl2F6N4O2S

Молекулярная масса: 453,2

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 и 2 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Значения характеристики погрешности, нормативов оперативного
контроля точности, повторяемости, воспроизводимости (МСД)

Анализируемый объект

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Показатель точности (границы относительной погрешности, Р = 0,95), ±δ, %

Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), σr, %

Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), σR, %

Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %

Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, %, (Р = 0,95)

Фипронил

Продукты яичные сухие пищевые

0,002 - 0,05

50

7,7

10,8

22

30

Яйца

0,002 - 0,05

50

7,1

9,9

20

28

Мясо и субпродукты птицы

0,002 - 0,05

50

6,1

8,5

17

24

Фипронил-сульфон

Продукты яичные сухие пищевые

0,002 - 0,05

50

8,7

12,2

24

34

Яйца

0,002 - 0,05

50

6,5

9,1

18

26

Мясо и субпродукты птицы

0,002 - 0,05

50

7,9

11,0

22

31

Таблица 2

Значения характеристики погрешности, нормативов оперативного
контроля точности, повторяемости, воспроизводимости (ДЭЗ)

Анализируемый объект

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Показатель точности (границы относительной погрешности, Р = 0,95), ±δ, %

Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), σr, %

Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), σR, %

Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %

Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, %, (Р = 0,95)

Фипронил

Продукты яичные сухие пищевые

0,005 - 0,05

50

8,6

12,0

24

34

Яйца

0,005 - 0,05

50

7,2

10,1

20

28

Мясо и субпродукты птицы

0,005 - 0,05

50

6,4

9,0

18

25

Фипронил-сульфон

Продукты яичные сухие пищевые

0,005 - 0,05

50

5,9

8,2

16

23

Яйца

0,005 - 0,05

50

5,0

6,9

14

19

Мясо и субпродукты птицы

0,005 - 0,05

50

7,7

10,8

22

30

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3 (МСД) и 4 (ДЭЗ).

Таблица 3

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата (МСД)

Анализируемый объект

Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20

предел обнаружения, мг/кг

диапазон определяемых концентраций, мг/кг

полнота извлечения вещества, %

стандартное отклонение, %

доверительный интервал среднего результата, ±, %

Фипронил

Продукты яичные сухие пищевые

0,002

0,002 - 0,05

103,9

8,0

4,2

Яйца

0,002

0,002 - 0,05

87,7

8,2

4,3

Мясо и субпродукты птицы

0,002

0,002 - 0,05

91,7

10,4

5,4

Фипроннл-сульфон

Продукты яичные сухие пищевые

0,002

0,002 - 0,05

101,2

9,9

5,2

Яйца

0,002

0,002 - 0,05

86,6

9,3

4,8

Мясо и субпродукты птицы

0,002

0,002 - 0,05

95,8

13,0

6,8

Таблица 4

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата (ДЭЗ)

Анализируемый объект

Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20

предел обнаружения, мг/кг

диапазон определяемых концентраций, мг/кг

полнота извлечения вещества, %

стандартное отклонение, %

доверительный интервал среднего результата, ±, %

1

2

3

4

5

6

Фипронил

Продукты яичные сухие пищевые

0,005

0,005 - 0,05

81,9

8,3

4,3

Яйца

0,005

0,005 - 0,05

89,6

6,0

3,2

Мясо и субпродукты птицы

0,005

0,005 - 0,05

90,4

5,9

3,1

Фипронил-сульфон

Продукты яичные сухие пищевые

0,005

0,005 - 0,05

82,4

6,4

3,4

Яйца

0,005

0,005 - 0,05

86,4

7,5

3,9

Мясо и субпродукты птицы

0,005

0,005 - 0,05

90,8

7,7

4,0

2. Метод измерений

Метод основан на определении фипронила и фипронил-сульфона с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с масс-селективным детектором (МСД) и детектором электронного захвата ионов (ДЭЗ).

Метод включает два способа пробоподготовки.

Согласно первому способу экстракцию веществ из анализируемых проб выполняют ацетонитрилом, содержащим 1 % уксусной кислоты, с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния и хлорида натрия), очистку экстрактов проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе амина, октадецилсилана и графитизированной сажи.

По второму способу экстракцию веществ из анализируемых проб выполняют 30 %-м ацетоном в ацетонитриле, пробы вымораживают, фильтруют и очищают аликвоту экстракта на колонке, содержащей силикагель и флорисил.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства,
реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5 - 790 мм рт. ст. и с пределом допустимой погрешности (1 ± 2,5) мм рт. ст.

ГОСТ Р 53228-08

Весы аналитические с пределом взвешивания 110 г и пределом допустимой погрешности

ГОСТ Р 53228-08

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 420 г и пределом допустимой погрешности ±0,01 г

ГОСТ 1770-74

Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором с пределом детектирования по октафторнафталину 10-14 г, предназначенный для работы с капиллярными колонками

Газовый хроматограф, снабженный электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану 1,6×10-14 г/с, предназначенный для работы с капиллярными колонками

Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90 %

Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 50, 100 и 1000 см3

Меры массы

ГОСТ OIML R 111-1-09

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см3

ГОСТ 29227-91

Термометр с диапазоном измерений от 0 до 55 °С и ценой деления 0,1 °С

ГОСТ 28498-90

Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 10, 100 и 250 см3

ГОСТ 1770-74

Примечание. Допускается использование других средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Фипронил, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,6 %

Фипронил-сульфон, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 98,9 %

Азот газообразный нулевой, в баллонах

ТУ 6-21-39-96

Ацетонитрил для хроматографии, хч

ТУ 6-09-14-2167-84

Ацетон, осч

ГОСТ 2603-79

Гелий газообразный вч, в баллонах

ТУ 0271-001-45905715-02

Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная)

ГОСТ Р 52501-05

Калий марганцовокислый (перманганат калия), хч

ГОСТ 20490-75

Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный

ГОСТ 4221-76

Магний сернокислый (сульфат магния), безводный хч

ГОСТ 4523-77

Натрий сернокислый (сульфат) безводный, хч

ГОСТ 4166-76

Натрий хлористый (хлорид натрия), хч

ГОСТ 4233-77

Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми пропиламинными группами: (CH2)3NH2 (SPA), площадь поверхности ~570 м2/г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм

Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами (CH2)17CH3 (С18ЕС), площадь поверхности ~547 м2/г, средний размер пор 64 А, средний размер частиц 58 мкм

Графитизированная сажа (GCB), специфическая площадь поверхности - 100 м2/г, размер частиц 120/400 меш

Силикагель 60, нейтральный, для колоночной хроматографии (размер частиц 63 - 200 меш)

Уксусная кислота, ледяная, хч

ГОСТ 61-75

Флорисил, активный, для колоночной хроматографии (размер частиц 60 - 100 меш)

Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора), хч

ГОСТ 22300-76

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные средства измерений,
устройства, материалы

Аппарат для встряхивания или орбитальный шейкер, диапазон регулировки оборотов 50 - 200 об./мин, орбита до 10 мм

Баня водяная

Баня ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц

Воронки химические стеклянные конусные

ГОСТ 25336-82

Воронка Бюхнера

ГОСТ 9147-80

Виала стеклянная на 1,5 см3 с крышкой и фторопластовой прокладкой

Груша резиновая

ТУ 9398-005-0576-9082-03

Измельчитель бытовой

Керамические гомогенизаторы для пробирок на 50 см3

Колба Бунзена

ГОСТ 23932-92

Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 25, 50 и 150 см3

ГОСТ 9737-93

Колбы плоскодонные конические вместимостью 250 см3

ГОСТ 25336-82

Колонка стеклянная длиной 25 см, внутренним диаметром 10 - 12 мм

Холодильник/морозильник бытовой

Насос водоструйный

ГОСТ 25336-82

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками вместимостью 2 и 50 см3

Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30

ГОСТ 25336-82

Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающий вакуум до 10 мбар

Стаканы химические с носиком вместимостью 400 см3

ГОСТ 25336-82

Стекловата

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,22 мкм

ТУ 2642-001-68085491-11

Фильтры бумажные средней плотности, обеззоленные

Центрифуга лабораторная, роторная, скорость вращения до 4000 об./мин

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 5 % - фенил и 95 % - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм)

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 14 % - цианопропилфенил, 86 % - метилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм)

Шприцы медицинские одноразовые вместимостью 5 см3

ГОСТ 24861-91

Примечание. Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-15. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением» (утв. приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы методом капиллярной газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на газовых хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, раствора внесения, установление градуировочных характеристик, подготовка смеси солей и сорбентов, подготовка колонки, проверка поведения веществ на ней.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонке с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.2. Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм3 ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм3 ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.2. Приготовление раствора уксусной кислоты в ацетонитриле
с объемной долей 1 % (1 %-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 300 - 400 см3 ацетонитрила, вносят 10 см3 ледяной уксусной кислоты, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.3. Приготовление раствора ацетона в ацетонитриле
с объемной долей 30 % (30 %-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 300 - 400 см3 ацетонитрила, вносят 300 см3 ацетона, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.4. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.4.1. Исходный раствор фипронила для градуировки
(концентрация 100 мкг/см3)

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,01 ± 0,0001) г фипронила, растворяют в 50 - 70 см3 ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение 6 месяцев.

7.4.2. Исходный раствор фипронил-сульфона для градуировки
(концентрация 100 мкг/см3)

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (0,01 ± 0,0001) г фипронил-сульфона, растворяют в 50 - 70 см3 ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение 6 месяцев.

7.4.3. Рабочий раствор № 1 фипронила и фипронил-сульфона для градуировки
и внесения (концентрация 1 мкг/см3)

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают по 1,0 см3 исходных градуировочных растворов фипронила и фипронил-сульфона с концентрациями 100,0 мкг/см3 (п. 7.4.1 и 7.4.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 1 с концентрациями фипронила и фипронил-сульфона по 1,0 мкг/см3.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов измерений методом «добавок».

7.4.4. Серия № 1 (МСД). Рабочие растворы № 2 - 6 фипронила и
фипронил-сульфона для градуировки
(концентрации 0,002 - 0,05 мкг/см3)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см3 помещают по 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 и 5,0 см3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3 (п. 7.4.3), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 - 6 с концентрацией фипронила и фипронил-сульфона 0,002; 0,005; 0,01; 0,02 и 0,05 мкг/см3 соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике (4 ± 2) °С в течение одной недели.

7.4.5. Серия № 2 (ДЭЗ). Рабочие растворы № 2′ - 6′ фипронила и
фипронил-сульфона для градуировки
(концентрации 0,005 - 0,05 мкг/см3)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см3 помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 2,5 и 5,0 см3 градуировочного раствора № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3 (п. 7.4.3), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2′ - 6′ с концентрацией фипронила и фипронил-сульфона 0,005; 0,01; 0,02; 0,025 и 0,05 мкг/см3 соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение одной недели.

7.5. Приготовление смеси солей для экстракции

Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4 ± 0,01) г магния сернокислого и (1 ± 0,01) г натрия хлористого, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

Примечание. Возможно использование коммерческих наборов солей QuEChERS для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г.

7.6. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 2 см3 помещают (50 ± 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (50 ± 4) мг графитизированной сажи, (150 ± 4) мг магния сернокислого и (50 ± 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих дисперсионных наборов QuEChERS для фруктов и овощей с маслом и пигментами, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 2 см3.

7.7. Подготовка колонки для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10 - 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, засыпают 2 г флорисила, 2 г силикагеля и 6 г безводного сульфата натрия, легко утрамбовывая каждый слой. Колонку промывают последовательно 25 см3 ацетона и 25 см3 ацетонитрила. Скорость прохождения растворителя 1 - 2 капли в секунду. Не допускать высыхания верхнего слоя! Колонка готова к работе.

7.8. Проверка хроматографического поведения фипронила и
фипронил-сульфона на колонке

В круглодонную колбу вместимостью 25 см3 помещают 1,0 см3 градуировочного раствора № 6′ с концентрацией фипронила и фипронил-сульфона 0,05 мкг/см3 (п. 7.4.5), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 - 40 °С. Остаток растворяют в 3,0 см3 ацетонитрила, помещая на ультразвуковую баню на 30 с. Полученную пробу наносят на колонку, подготовленную по п. 7.8.

Колбу обмывают дважды ацетонитрилом, порциями по 3 см3, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1 - 2 капли в секунду. Элюат отбрасывают. Вещества элюируют 75 см3 ацетонитрила, собирая 5 порций элюента по 15 см3 в 5 круглодонных колб для упаривания вместимостью 50 см3. Растворы упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, сухой остаток растворяют в 1 см3 ацетона, анализируют содержание фипронила и фипронил-сульфона по п. 9.3.1 или 9.3.2.

Фракции, содержащие фипронил и фипронил-сульфон, объединяют и вновь анализируют. Устанавливают уровень веществ в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического поведения веществ следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

7.9. Установление градуировочных характеристик

Градуировочные характеристики, выражающие линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации фипронила или фипронил-сульфона в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки № 2 - 6 (серия 1) и № 2′ - 6′ (серия 2).

В инжектор газового хроматографа вводят по 1 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.1 или п. 9.3.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков веществ, на основании которых строят градуировочные зависимости.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб осуществляют в соответствии с ГОСТ 30363-13 «Продукты яичные жидкие и сухие пищевые. Технические условия», ГОСТ 31654-12 «Яйца куриные пищевые. Технические условия», ГОСТ 31467-12 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям».

Пробы продуктов яичных сухих пищевых хранят при комнатной температуре не более 2 недель. Пробы яиц хранят при температуре (4 ± 2)°С не более недели, мяса и субпродуктов птиц - не более суток. Для длительного хранения пробы продуктов яичных сухих пищевых, яиц, мяса и субпродуктов птицы помещают в морозильную камеру (температура не выше -18 °С).

9. Выполнение определения

9.1. Способ 1

9.1.1 Экстракция

Образец продуктов яичных сухих пищевых, взбитых яиц, измельченного мяса или субпродуктов птицы массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см3. Пробу взбитых яиц, измельченного мяса и субпродуктов птицы помещают на 10 - 15 мин в морозильную камеру. Добавляют 10 см3 1 %-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле (подготовленного по п. 7.5). Далее в пробу меланжа вносят 10 см3 бидистиллированной воды, в пробу порошка яичного белка пастеризованного - 15 см3 бидистиллированной воды. Помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 1 мин, вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 7.6), закрывают крышкой и снова интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу помещают на 10 - 15 мин в морозильную камеру, центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4000 об./мин и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 9.1.2.

9.1.2. Очистка экстракта

Надосадочную жидкость (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 1,5 - 1,8 см3 с помощью пипетки переносят в полипропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 7.6. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную в течение 30 с. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4000 об./мин и помещают в морозильник на 10 - 15 мин. Отбирают с помощью медицинского шприца раствор, фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,22 мкм) в стеклянную виалу на 1,5 см3 и анализируют по п. 9.3.1 или 9.3.2.

9.2. Способ 2

9.2.1. Экстракция

Пробу продуктов яичных сухих пищевых, взбитых яиц, измельченного мяса или субпродуктов птицы массой 25 г помещают в коническую плоскодонную колбу вместимостью 250 см3, добавляют 100 см3 30 %-го раствора ацетона в ацетонитриле (подготовленного по п. 7.3). Вручную перемешивают в течение 1 мин, выдерживают на ультразвуковой бане в течение 15 с и помещают на аппарат для встряхивания на 15 мин. Затем пробу помещают на 1 ч в морозильную камеру.

Раствор фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр средней плотности. Осадок на фильтре промывают 30 см3 30 %-го раствора ацетона в ацетонитриле.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 см3. Общий объем экстракта доводят до 150 см3 ацетонитрилом. Перемешивают и пипеткой вместимостью 10 см3 отбирают аликвоту объемом 6 см3 (1/25 часть экстракта, соответствует 1 г пробы) для очистки на колонке по п. 9.2.2.

9.2.2. Очистка экстракта на колонке с сорбентами

Аликвоту экстракта объемом 6 см3 (полученную по п. 9.2.1) наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1 - 2 капли в секунду.

Фипронил и фипронил-сульфон элюируют с колонки 75 см3 ацетонитрила (элюент), собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 см3, раствор упаривают до объема приблизительно 5 см3 при температуре не выше 35 °С, переносят раствор в круглодонную колбу на 25 см3, омывая колбу на 150 см3 три раза ацетонитрилом порциями по 2 - 3 см3 и упаривают досуха при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 1,0 см3 ацетона, помещают на ультразвуковую баню на 30 с и анализируют содержание веществ по п. 9.3.1 или 9.3.2.

Примечание. Объем элюента может быть изменен в соответствии с результатами проверки хроматографического поведения веществ на колонке по п. 7.7.

9.3. Условия хроматографирования

9.3.1. Метод газожидкостной хроматографии
с масс-селективным детектором (МСД)

Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором (МСД)

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 5 % - фенил, 95 % - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм).

Температура детектора: квадруполя - 150 °С, источника - 230 °С, переходной камеры - 280 °С.

Температура испарителя: 270 °С.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 100 °С, выдержка 1 мин, нагрев колонки со скоростью 15 градусов в минуту до температуры 220 °С, выдержка 5 мин, затем нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 270 °С, выдержка 3 мин.

Газ 1 (гелий): поток в колонке 1,2 см3/мин,

давление 12,93 psi, средняя линейная скорость 40,853 см/с.

Хроматографируемый объем: 1 мм3.

Режим регистрации индивидуальных ионов

Отношение масса-заряд:

фипронил - 367 (количественный расчет), 255, 213

фипронил-сульфон - 383 (количественный расчет), 255, 452

Линейный диапазон детектирования: 0,002 - 0,05 нг.

Ориентировочное время удерживания: фипронила - 11,35 мин, фипронил-сульфона - 13,12 мин.

9.3.2. Метод газожидкостной хроматографии
электронозахватным детектором (ДЭЗ)

Газовый хроматограф, снабженный электронозахватным детектором (ДЭЗ)

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 14 % - цианопропилфенил, 86 % - метилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм).

Температура: детектора - 280 °С,

Испарителя - 260 °С

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 180° С, выдержка 3 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 250 °С, выдержка 6 мин, затем нагрев колонки со скоростью 25 градусов в минуту до температуры 270 С.

Газ 1 (азот): давление 100 кПа, скорость 29 см/с.

Газ 2: деление потока 1:2, сброс 5,5 см3/мин.

Хроматографируемый объем: 2 мм3.

Линейный диапазон детектирования: 0,01 - 0,1 нг.

Ориентировочное время удерживания: фипронила - 10,59 мин, фипронил-сульфона - 12,31 мин.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор фипронила или фипронип-сульфона с концентрацией 0,05 мкг/см3, разбавляют ацетоном, не более чем в 50 раз.

10. Обработка результатов анализа

Содержание фипронила с учетом его метаболита фипронил-сульфона (в эквиваленте фипронила) в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

А - концентрация фипронила, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;

Б - концентрация фипронил-сульфона, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см3;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

V = 10 см3 (способ 1) и К = 1,0 см3 (способ 2);

m - масса анализируемого образца, г;

С - коэффициент пересчета, учитывающий объем аликвоты экстракта, взятой для анализа, С = 1 (способ 1), С = 25 (способ 2);

К - коэффициент пересчета содержания фипронил-сульфона на эквивалент фипронила по соотношению молекулярных масс (К = 0,96).

11. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг; r - значение предела повторяемости (табл. 1, 2), при этом r = 2,8σr.

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

( ± Δ) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1, 2), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание фипронила и фипронил-сульфона в пробе продуктов яичных сухих пищевых, яиц, мяса и субпродуктов птицы: менее 0,002 мг/кг (метод газожидкостной хроматографии с масс-селективным детектором (МСД); менее 0,005 мг/кг (метод газожидкостной хроматографии с электронозахватным детектором (ДЭЗ)*

________

* 0,002 мг/кг; 0,005 мг/кг - нижние пределы количественного определения в пробе продуктов яичных сухих пищевых, яиц, мяса и субпродуктов птицы с применением МСД и ДЭЗ соответственно.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочных характеристик проводят измерения не менее двух градуировочных растворов, содержание фипронила и фипронил-сульфона в которых должно входить в диапазон линейности градуировочной характеристики от 0,002 до 0,05 мкг/см3 (МСД) и от 0,005 до 0,05 мкг/см3 (ДЭЗ).

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация фипронила или фипронил-сульфона в пробе при контрольном измерении, мкг/см3;

С - известная концентрация градуировочного раствора фипронила или фипронил-сульфона, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см3;

В - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (В = 10 % при Р = 0,95).

Если величина расхождения (А) превышает 10 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов фипронила и фипронил-сульфона, предусмотренных МИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.9.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом «добавок».

Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Δл = ±0,84Δ, где

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1, 2), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

, , Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

к| ≤ К

(1)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

(2)

X1, Х2 - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1, 2), %.